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    激光顯微細胞分離技術(shù)

    發(fā)布時間: 2012-02-07  點擊次數(shù): 1996次

    激光顯微細胞分離技術(shù)
    美國國立健康研究院腫瘤研究所病理研究室與生物醫(yī)學設(shè)備組合作研發(fā)激光俘獲顯微切割技術(shù),發(fā)展為Acturus 的PixCell II系統(tǒng)。在操作這套系統(tǒng)時,首先在組織切片上覆蓋一層透明的膜,在顯微鏡下觀察該組織切片,選擇某一特殊細胞后,開啟脈沖式紅外激光束,使膜融化變得粘性很強(該膜的成份為 Ethylene Vinyl Acetate Polymer),等到冷卻后將該位置的細胞牢固地粘附在上面從而分離細胞。
    該種方法較以往方法改進之處:首先,它簡單,不需要移動任何切片部位,一步即可完成從組織中分離特殊細胞,這些在膜上的細胞依然保持其原有的形態(tài),使用無菌、一次性的膜可zui大限度地避免可能的污染。這對于后續(xù)進行PCR檢測是尤為重要的。其次,使膜活化所需的激光能量很小(<50mW),與常規(guī)顯微配合是充足的,完夠滿足臨床病理組織細胞顯微分離的需要。再者,LCM技術(shù)分離細胞速度較以往方法有很大提高,例如,從腎組織切片中分離一激光顯微細胞分離技術(shù) 個腎小球(Glomerulus)所需時間小于10秒,一小時內(nèi)即可輕松地分離上百個腎小球。
    神經(jīng)系統(tǒng)主要由兩類細胞組成:神經(jīng)元和膠質(zhì)細胞。在腦內(nèi),不同解剖區(qū)域行使不同功能,這里所講的解剖區(qū)域是指核團。核團在顯微鏡下才可以辨別,是相對集中在一個區(qū)域的可能行使一定功能的神經(jīng)元和膠質(zhì)細胞的集合體。把某個核團從腦內(nèi)取出來是不太現(xiàn)實的。腦內(nèi)核團數(shù)以百計,如果要想研究基因在腦內(nèi)核團的表達水平,在以前只能用原位雜交技術(shù)。
    如果要想研究蛋白質(zhì)的表達水平或磷酸化等狀態(tài),只能用免疫組織化學技術(shù)。而這兩個技術(shù)雖然能定位基因或蛋白質(zhì)在腦內(nèi)核團的表達情況,缺點是通量小。
    因此,如果研究者主要是為了研究很多種基因在特定核團的神經(jīng)元或膠質(zhì)細胞的表達情況,新的解決方案之一就是組合LCM技術(shù)、RNA擴增技術(shù)和基因芯片技術(shù)。即利用LCM技術(shù)將特定核團的神經(jīng)元或膠質(zhì)細胞取出,提取總RNA或mRNA,RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA并進行擴增.zui后將cDNA標記為探針,和基因芯片雜交。如果研究的基因種類數(shù)不多,那么也可以只提取LCM獲得的細胞的總RNA,利用定量RT-PCR技術(shù)來進行基因表達分析。

    激光顯微細胞分離技術(shù)
     

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